De hervormde godsdienst werd verplicht

In de zestiende eeuw kwam er binnen de kerk een protestbeweging op gang tegen de macht van de heersende (rooms-katholieke) kerk en de katholieke vorsten. In de Nederlanden leidde Willem van Oranje het verzet tegen het Spaanse koningshuis, dat het hier voor het zeggen had. 
In 1580 koos de Stadhouder van Groningen de kant van Spanje in de Nederlandse opstand, die ook bekend staat als de Tachtigjarige Oorlog. Maar de stadhouders Lodewijk Willem (Friesland) en Maurits (Holland en Zeeland) belegerden in 1594 de stad en namen die in. Groningen werd toegevoegd aan de Unie van Utrecht en de hervormde godsdienst werd verplicht.
In de Der Aa-kerk werd op 14 augustus 1594 de eerste hervormde eredienst gehouden. ‘Den 2 Augusti hefft men oock uth der Ae Kercke die affgodische beelden ghedaen. Den 14 Augusti is in der Ae de eerste mael gepredighet. Dess sij Godt gheloovet in eeuwicheijt.’